Час аналізу значна скарачаецца прыкладна з гадзіны да некалькіх хвілін з дапамогай новага метаду RTF-EXPAR, які выкарыстоўвае падыход без зваротнай транскрыптазы (RTF) для пераўтварэння РНК ў ДНК затым EXPAR (рэакцыя экспанентнага ўзмацнення) для ўзмацнення пры адной тэмпературы.
Кантралюючы хуткасць Covid-19 распаўсюджванне патрабуе дакладнай і больш хуткай стратэгіі тэставання на вірусы. АД-ПЦР (палімеразная ланцуговая рэакцыя зваротнай транскрыптазы), найбольш дакладны метад тэставання, які выкарыстоўваецца ў цяперашні час, - гэта двухэтапны тэст, які займае каля 60 хвілін на ўзор.
Даследнікі з Універсітэта Бірмінгема паведамілі пра новы метад выяўлення SARS-CoV-2. Гэта можа забяспечыць значна больш хуткае тэставанне і з'яўляецца дастаткова адчувальным.
Выяўленне віруснай РНК па АД-ПЦР (палімеразная ланцуговая рэакцыя зваротнай транскриптазы) уключае пераўтварэнне віруснай РНК у камплементарную ДНК (кДНК) з наступным ампліфікацыяй кДНК з дапамогай колькаснай ПЦР (кПЦР). Затым кДНК вызначаюць з дапамогай флуоресцентного фарбавальніка. Гэта займае да гадзіны.
Час аналізу значна скарачаецца з прыкладна гадзіны да некалькіх хвілін з дапамогай новага метаду RTF-EXPAR, які выкарыстоўвае падыход без зваротнай транскрыптазы (RTF) для пераўтварэння РНК у ДНК затым EXPAR (рэакцыя экспанентнага ўзмацнення) для ўзмацнення пры адной тэмпературы. Ампліфікацыя, якая адбываецца пры адной тэмпературы, з'яўляецца ключом да хуткасці, таму што дазваляе пазбегнуць працяглых этапаў нагрэву і астуджэння RT-PCR. Акрамя таго, участак ДНК, які ўзмацняецца, меншы ў параўнанні з RT-PCR. Такім чынам, EXPAR стварае да 108 нітак прадукту ДНК за некалькі хвілін. Утварэнне дуплекса кантралюецца, як і ў метадзе RT-PCR з выкарыстаннем флуоресцентного фарбавальніка SYBR Green.
Цікава, што новы метад можа быць мадыфікаваны для выяўлення шэрагу іншых інфекцыйных захворванняў, выкліканых РНК-вірусамі, напрыклад, Эбола, RSV і г.д.
Крыніца (ы):
Картэр і інш (2020). Выяўленне РНК SARS-CoV-5 менш за 2 хвілін з дапамогай рэакцыі экспанентнага ўзмацнення без зваротнай транскриптазы, RTF-EXPAR. Пераддрук. Апублікавана ў medRxiv Апублікавана 04 студзеня 2021 г. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
